Home » Εργαστήρια

Χρώση κατά Gram (παλιό υλικό)

Submitted by on June 25, 2009 – 8:34 amNo Comment
Χρώση κατά Gram (παλιό υλικό)

Η χρώση κατά Gram είναι μια μέθοδος χρώσης η οποία αναπτύχθηκε από τον Δανό Gram το 1884. Βοηθά στην ταυτοποίηση και ταξινόμηση των μικροβίων κατά Gram-θετικά και Gram-αρνητικά βακτήρια. Σχετικά με την χρώση Gram μπορείτε να δείτε την ανάρτηση “Ταξινόμηση και Ταυτοποίηση Μικροοργανισμών”.

Τα στάδια της χρώσης κατά Gram είναι τα εξής [Πηγή: Εργαστήριο Μικροβιολογίας – Τμήμα Βιολογίας, Πανεπιστήμιο Πατρών]:

  • Μια σταγόνα απιονισμένου νερού τοποθετείται σε αντικειμενοφόρο πλάκα. Κύτταρα βακτηρίων μεταφέρονται ασηπτικά με βακτηριολογικό κρίκο και δημιουργείται κατά το δυνατόν ομοιογενές γαλάκτωμα. Στη συνέχεια η σταγόνα εξαπλώνεται στην κεντρική περιοχή της αντικειμενοφόρου πλάκας με τη βοήθεια βακτηριολογικού κρίκου.
  • Το παρασκεύασμα προσηλώνεται περνώντας την αντικειμενοφόρο πλάκα πάνω από τη φλόγα λύχνου, χωρίς όμως να υπερθερμανθεί. Θα πρέπει η πλάκα κατά τη διαδικασία της προσήλωσης να είναι ανεκτή όταν τοποθετείται στην εξωτερική όψη του χεριού (όχι στην παλάμη). Η προσήλωση ολοκληρώνεται όταν το παρασκεύασμα στεγνώσει.
  • Επί του παρασκευάσματος προστίθενται μερικές σταγόνες κρυσταλλικού ιώδους και η χρωστική επαφίεται να δράσει για 1 min. Το κρυσταλλικό ιώδες χρωματίζει βαθύ κυανό χρώμα όλα ανεξαιρέτως τα βακτηριακά κύτταρα.
  • Στη συνέχεια απομακρύνεται η περίσσεια της χρωστικής με νερό και το παρασκεύασμα επεξεργάζεται για 3 min με διάλυμα Ι2/ΚΙ. Το παρασκεύασμα ξεπλένεται με αλκοόλη (σταγόνα-σταγόνα για 1-3 min) και στη συνέχεια με άφθονο νερό (επίσης σταγόνα-σταγόνα). Στο στάδιο αυτό μερικά μόνο κύτταρα (τα θετικά κατά Gram) διατηρούν το κυανό χρώμα, τα υπόλοιπα αποχρωματίζονται.
  • Το παρασκεύασμα καλύπτεται με σαφρανίνη (για 1-2 min) και στη συνέχεια ξεπλένεται η περίσσεια της χρωστικής με νερό.
  • Η περίσσεια του νερού απομακρύνεται με απορροφητικό χαρτί, χωρίς αυτό να σύρεται στην επιφάνεια της πλάκας. Ακολουθεί μικροσκοπική παρατήρηση σε μεγέθυνση Χ40 και στη συνέχεια Χ100 (με ελαιοκατάδυση).

Παρακάτω ένα βίντεο για τη διαδικασία της χρώσης κατά Gram. [Πηγή: Gram staining]

Τέλος, μια διαγραμματική απεικόνιση της διαδικασίας χρώσης βακτηρίων με τη χρώση Gram. [Πηγή: Εργαστήριο Μικροβιολογίας – Τμήμα Βιολογίας, Πανεπιστήμιο Πατρών]

Share this...
Share on Facebook
Facebook
Email this to someone
email

Leave a comment!

Add your comment below, or trackback from your own site. You can also subscribe to these comments via RSS.

Be nice. Keep it clean. Stay on topic. No spam.

You can use these tags:
<a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

This is a Gravatar-enabled weblog. To get your own globally-recognized-avatar, please register at Gravatar.