Home » Εργαστήρια

Χρώση Ziehl-Neelsen (παλιό υλικό)

Submitted by on October 2, 2009 – 11:46 pmNo Comment
Χρώση Ziehl-Neelsen (παλιό υλικό)

Μια βασική χρώση της Μικροβιολογίας είναι η χρώση Ziehl-Neelsen, για οξεάντοχους οργανισμούς (μυκοβακτηρίδια, νοκάρδιες, ακτινομύκητες, κρυπτοσπορίδια). Επινοήθηκε το 1882 από τους Franz Ziehl (1859-1926) και Friedrich Neelsen (1854-1894). Ο σκοπός της χρώσης είναι η διαφοροποίηση των οξεάντοχων μικροοργανισμών. Οξεάντοχοι ονομάζονται οι μικροοργανισμοί οι οποίοι διατηρούν την βασική χρωστική, Carbol fuchsin κατά τον αποχρωματισμό του παρασκευάσματος με οξινοποιημένη αλκοόλη λόγω της ύπαρξης μυκολικού οξέος στο κυτταρικό τους τοίχωμα. Παρακάτω θα σας περιγράψω την διαδικασία αναλυτικά δίνοντας και μια συνέχεια στην παρουσίαση των Άτυπων μυκοβακτηριδίων, μιας και ήταν η βασική χρώση που χρησιμοποίησα.

Τα στάδια είναι τα εξής:

  • Δημιουργία επιχρίσματος: Κατανομή λεπτής στοιβάδας υλικού στην επιφάνεια αντικειμενοφόρου πλάκας το οποίο περιέχει μικροοργανισμούς. Αποξήρανση στον αέρα.
  • Μονιμοποίηση παρασκευάσματος: Διαδικασία με την οποία σκοτώνονται οι μικροοργανισμοί και προσκολλώνται στην επιφάνεια της αντικειμενοφόρου πλάκας. Η μονιμοποίηση συντηρεί και ελαχιστοποιεί την παραμόρφωση των κυττάρων. Πραγματοποιείται ή με θερμή μονιμοποίηση (διέλευση πάνω από τη φλόγα λύχνου Bunsen μερικές φορές) ή με χημική μονιμοποίηση (κάλυψη του επιχρίσματος με μεθανόλη για 1 λεπτό)
  • Ακολουθεί η κάλυψη του παρασκευάσματος με επαρκή ποσότητα βασικής χρωστικής φαινικούχο φουξίνης, Carbol fuchsin (υλικά και μέθοδος παραγωγής carbol fuchsin) έτσι ώστε η πλάκα να είναι πλήρως καλυμμένη με χρωστική σε όλη τη διάρκεια αυτής της φάσης.
  • Συνεχίζεται η θέρμανση της βασικής χρωστικής (φαινικούχο φουξίνη) για 5 λεπτά: Γίνεται θέρμανση του παρασκευάσματος μέχρι την παραγωγή ατμών χωρίς να παρατηρηθεί βρασμός. Η θέρμανση γίνεται με διέλευση της φλόγας κάτω από την αντικειμενοφόρο πλάκα . Η θέρμανση θα πρέπει να γίνει με προσοχή γιατί έντονη θέρμανση της αντικειμενοφόρου πλάκας μπορεί να προκαλέσει θραύση της πλάκας, όπως και καταστροφή του δείγματος.

  • Ακολουθεί το ξέπλυμα της αντικειμενοφόρου πλάκας με νερό και πραγματοποιείται αποχρωματισμός με οξυνισμένο οινόπνευμα (υλικά και μέθοδος παραγωγής acid alcohol) και ξανά ξέπλυμα της αντικειμενοφόρου πλάκας με νερό.

  • Στην συνέχεια κάλυψη της αντικειμενοφόρου πλάκας με κυανό του μεθυλενίου (υλικά και μέθοδος παραγωγής methylene blue) για 1 λεπτό. Ακολουθεί ξέπλυμα της αντικειμενοφόρου πλάκας με νερό, στέγνωμα πάνω σε διηθητικό χαρτί και τέλος, μικροσκόπηση με 100x καταδυτικό φακό.

Πηγή Φωτογραφιών: http://secure.provlab.ab.ca/bugs/mycob/afb_stain/znstain.htm

Εάν όλα τα παραπάνω στάδια πραγματοποιηθούν επιτυχώς θα δούμε στο μικροσκόπιο εικόνες όπως η παρακάτω.

Θετικό δείγμα σε χρώση Ziehl Neelsen – Κόκκινοι βακίλλοι σε μπλε φόντο

Share this...
Share on Facebook
Facebook
Email this to someone
email

Leave a comment!

Add your comment below, or trackback from your own site. You can also subscribe to these comments via RSS.

Be nice. Keep it clean. Stay on topic. No spam.

You can use these tags:
<a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

This is a Gravatar-enabled weblog. To get your own globally-recognized-avatar, please register at Gravatar.